本发明属于中药领域，公开一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法和应用。该中药组合物由下述按重量份数计的中药原料制成：山豆根10～30份，白英10～30份，苦丁茶10～30份，侧柏叶10～30份，叶子花10～30份；将所述重量份数的中药原料混合后加水浸泡2～3小时，加热煎煮后倾出煎煮液，再加水加热煎煮并倾出煎煮液，煎煮液合并后过滤，得到的清液经浓缩、喷雾干燥、粉碎后过筛，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。本发明中药组合物的血清与阿霉素联合使用可使阿霉素对白血病细胞阿霉素耐药株的半数抑制浓度明显下降，逆转倍数为2.87～4.37，且呈浓度正相关，具有显著的逆转肿瘤多药耐药的作用。
1.一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物，其特征在于：该中药组合物由下述按重量份数计的中药原料制备而成：山豆根10份，白英30份，苦丁茶10份，侧柏叶30份，叶子花10份；该中药组合物的制备方法包括如下步骤：（1）将山豆根10重量份，白英30重量份，苦丁茶10重量份，侧柏叶30重量份与叶子花10重量份混合后加入各中药原料总重量9～10倍量的水浸泡2～3小时，加热煎煮1.5～2小时，倾出煎煮液；药渣再加各中药原料总重量8～9倍量的水加热煎煮1～1.5小时，倾出煎煮液，将两次煎煮得到的煎煮液合并过滤，得到清液；（2）将清液浓缩至相对密度为1.05～1.06后进行喷雾干燥，得到喷雾干燥粉；将喷雾干燥粉粉碎至细度为30～100目，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物；所述逆转肿瘤多药耐药为逆转白血病肿瘤多药耐药。
2.根据权利要求1所述逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中的喷雾干燥条件为：进风温度为140～160℃，出风温度为100～110℃，雾化器转速50～60转/分钟，进料速度为3～5ml/分钟。
3.根据权利要求1所述的中药组合物在制备逆转白血病肿瘤多药耐药药物中的应用。技术领域
本发明属于中药领域，涉及一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物及其制备方法和应用。技术背景肿瘤细胞对抗肿瘤药物的多药耐药（multidrugxa0resistance,MDR）是导致肿瘤化学药物治疗失败的常见因素。目前国内肿瘤患病率呈上升趋势，并且90%的肿瘤患者的死亡在不同程度上受肿瘤细胞耐药的影响，因此需要研制新一代耐药逆转剂。已知某些中药具有钙拮抗作用，且药物作用较温和，并能在逆转MDR中提高化疗效果，具有很好的应用和开发前景。研究结果表明多种机制参与肿瘤细胞多药耐药形成，主要包括：细胞膜P-糖蛋白（Permeability-glycoprotein,P-gP）、多药耐药相关蛋白(Multidrugxa0Resistancexa0Associatedxa0Protein,MRP)的过度表达形成药物外输泵，使抗癌药物在肿瘤细胞内蓄积下降；谷胱甘肽-S-转移酶（GST）单独或与谷胱甘肽（GSH）一起参与多种细胞毒代谢及解毒过程；与细胞凋亡相关的因子及基因如bcl-2，P⁵³等异常。国内外针对上述环节进行了广泛研究以寻求拮抗和/或逆转肿瘤细胞MDR的药物，体外被证实具有逆转耐药活性的化合物或生物制剂很多，但真正进入临床研究的只有异博定、环孢菌素A等极少数，而且疗效不理想。目前还没有一种药物或方法在临床被广泛接受，原因在于：现有逆转剂大多为“老药新用”，逆转耐药往往不是其主要功能，临床使用禁忌症多，毒副作用大；生物制剂在体内不稳定，难以作用到靶点且毒副反应多；临床耐药往往数种机制同时参与，只对单一机制起作用的逆转剂难以发挥显著的效应。其中对于中药或有效单体成分研究而言，真正能结合临床疗效和中医理论的研究少见。从中医药学上讲，中药协同化疗治疗恶性肿瘤研究已从“扶正”“增效减毒”扩展到“抗癌增敏减毒”，并已明确提出中药的综合治疗概念，假使经过临床观察疗效确切的某种中药，其既起到逆转MDR活性，又能体现抗癌活性，并且两重作用有机结合，将使其成为接近理想的肿瘤耐药逆转剂，体现出高效、低毒、靶点广泛的特点。中国发明专利CN200710070320.4公开了“姜黄素在制备肿瘤多药耐药预防剂中的用途”，中国发明专利CN200710143393.1公开了“青蒿素在制备抗肿瘤多药耐药药物中的应用”；但目前有关作为肿瘤多药耐药逆转剂的中药组合物的报道较少。
发明内容
为了克服以上现有技术的不足，本发明的首要目的是提供一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。本发明的另一目的是提供上述逆转肿瘤多药耐药中药组合物的制备方法。本发明的目的还在于提供上述逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的应用。本发明的目的通过以下技术方案实现：一种逆转肿瘤多药耐药的中药组合物，由下述按重量份数计的中药原料制备而成：山豆根10～30份，白英10～30份，苦丁茶10～30份，侧柏叶10～30份，叶子花10～30份。优选地，上述逆转肿瘤多药耐药的中药组合物由下述按重量份数计的中药原料制备而成：山豆根12份，白英12份，苦丁茶18份，侧柏叶12份，叶子花18份。所述逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备方法包括如下步骤：（1）将山豆根10～30重量份，白英10～30重量份，苦丁茶10～30重量份，侧柏叶10～30重量份与叶子花10～30重量份混合后加各中药原料总重量9～10倍量水浸泡2～3小时，加热煎煮1.5～2小时，倾出煎煮液；药渣再加各中药原料总重量8～9倍量水加热煎煮1～1.5小时，倾出煎煮液，将两次煎煮得到的煎煮液合并过滤，得到清液；（2）将清液浓缩至相对密度为1.05～1.06后进行喷雾干燥，得到喷雾干燥粉；将喷雾干燥粉粉碎至细度为30～100目，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。所述步骤（2）中的喷雾干燥条件为：进风温度为140～160℃，出风温度为100～110℃，雾化器转速50～60转/分钟，进料速度为3～5ml/分钟。上述中药组合物可用于制备逆转肿瘤多药耐药的药物。本发明使用的中药原料的功效如下：山豆根：味苦，性寒；有毒；归肺、胃经；白英：味苦，性微寒；有小毒；入肝、胃经；苦丁茶：味甘，苦；性寒；归肝；肺；胃经；侧柏叶：味苦、涩，性寒；归肺、肝、脾经；叶子花：性味苦，涩；性温；归肝经；本发明采用各种中药原料配伍，起到清热解毒功效，应用在肿瘤多药耐药患者治疗中，可产生逆转肿瘤多药耐药的作用，且该中药组合物无毒副作用，起到提高化疗药物疗效的有益作用。与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：实验研究表明，本发明中药组合物的血清与阿霉素联合使用可使阿霉素对白血病细胞阿霉素耐药株的半数抑制浓度IC₅₀明显下降，不同给药浓度对白血病细胞阿霉素耐药株的逆转倍数为2.87～4.37，且呈浓度正相关，具有显著的逆转肿瘤多药耐药的作用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。实施例1逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备：（1）称取山豆根100g，白英300g，苦丁茶100g，侧柏叶300g和叶子花100g，混合后加各中药原料总重量9倍量水浸泡2小时，加热煎煮1.5h，倾出煎煮液；药渣再加各中药原料总重量8倍量水加热煎煮1.5h，倾出煎煮液，将两次煎煮得到的煎煮液合并过滤，得到清液；（2）将清液浓缩至相对密度为1.05时，送入喷雾干燥器进行喷雾干燥，进风温度控制为140℃，出风温度为100℃，雾化器转速50转/分钟，进料速度为3ml/分钟，得喷雾干燥粉30克；将喷雾干燥粉粉碎至细度为100目，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。实施例2逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备：（1）称取中药原料山豆根300g，白英100g，苦丁茶300g，侧柏叶100g和叶子花300g，混合后加各中药原料总重量10倍量水浸泡3小时，加热煎煮2h，倾出煎煮液；药渣再加各中药原料总重量8倍量水加热煎煮1h，倾出煎煮液，将两次煎煮得到的煎煮液合并过滤，得到清液；（2）清液浓缩至相对密度为1.05时，进喷雾干燥器，进风温度控制140℃，出风温度100℃，雾化器转速50转/分钟，进料速度为3ml/分钟，得喷雾干燥粉50克；将喷雾干燥粉粉碎至细度为80目，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。实施例3逆转肿瘤多药耐药的中药组合物的制备：（1）称取中药原料山豆根120g，白英120g，苦丁茶180g，侧柏叶120g，叶子花180g，混合后加各中药原料总重量9.5倍量水浸泡2.5小时，加热煎煮2h，倾出煎煮液；药渣再加各中药原料总重量9倍量水加热1h，倾出煎煮液，将两次煎煮得到的煎煮液合并过滤，得到清液；（2）清液浓缩至相对密度为1.06时，进喷雾干燥器，进风温度控制160℃，出风温度110℃，雾化器转速60转/分钟，进料速度为5ml/分钟，得喷雾干燥粉30克；将喷雾干燥粉粉碎至细度为30目，得到逆转肿瘤多药耐药的中药组合物。实施例4实施例1制备的中药组合物用于逆转多药耐药细胞系K562/ADR耐药性的实验结果如下：阿霉素是一种抗肿瘤抗生素，可抑制RNA和DNA的合成，对RNA的抑制作用最强，对多种肿瘤均有作用，属周期非特异性药物，对各种生长周期的肿瘤细胞都有杀灭作用。本实施例中白血病细胞K562/S为敏感株，K562/ADR为白血病细胞阿霉素耐药株，其中K562/ADR是由K562/S细胞接触递增浓度的阿霉素（ADR）诱导而成，具有典型多药耐药性。细胞株均培养于含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中。含药血清制备：NIH小鼠适应性饲养3天后，称重，根据随机数目表随机分为高剂量组、中剂量组、低剂量组、空白组共4组，每组10只；高剂量组的小鼠按本中药组合物40g/kg灌胃给药，中剂量组按20g/kg灌胃给药，低剂量组按10g/kg灌胃给药；空白对照组以生理盐水灌胃；给药2h后，取血离心分离血清，56℃30min灭活，用RPMI-1640配制不同浓度的血清培养液。逆转耐药的MTT检测：取对数生长期细胞，K562/ADR细胞以1×10⁵/ml、K562/S以0.5×10⁵/ml的浓度分别接种于96孔培养板，100μl/孔。在37℃和5%CO₂条件下培养过夜后，加不同浓度的含药血清和ADR共100μl，空白组加相应体积的培养液，每组设4个平行孔。培养72h后，每孔加5mg/ml噻唑蓝(MTT)20μl，再培养4h，倾去培养液，加二甲基亚砜（DMSO）100μl/孔，待完全溶解后，用酶联免疫仪在波长570nm处空白组调零后读取吸光度（A）值；取4孔A值的均数，求出半数抑制浓度（IC₅₀，细胞抑制率为50%时的药物浓度）；逆转倍数=空白组IC₅₀/试验组IC₅₀。表1实施例1制备的中药组合物对K562/ADR耐药株的逆转作用ntent="drawing" img-format="tif" inline="no" orientation="portrait" wi="700"/>由表1数据可见，含有本发明中药组合物的血清与ADR联合使用可使ADR对K562/ADR的IC₅₀明显下降，不同给药浓度对K562/ADR逆转倍数为2.87～4.37，且呈浓度正相关，表明本发明的中药组合物对K562/ADR耐药株具有逆转作用。上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。